在科研的渊博限制中，准确测量大鼠血管内皮滋长因子（VEGF）的浓度开云体育，关于深刻辩论联系生理和病理历程至关进攻。大鼠血管内皮滋长因子（VEGF）酶联免疫试剂盒，当作一款专科的科研器具，为科研东谈主员提供了精确检测的可能。

一、家具基础信息

试剂盒提供 96T 和 48T 两种规格，保质期为 6 个月。它主要用于体外定量检测血清、血浆或其他联系生物液体中大鼠血管内皮滋长因子的浓度。其聪惠度可达 1.0 pg/mL，大要精确地识别并检测样本中的 VEGF，与访佛物险些无交叉响应，特异性极佳。在相通性方面施展出色，板内和板间变异悉数均小于 10%，检测边界为 10 pg/mL – 320 pg/mL。需要强调的是，该试剂盒仅用于科研，严禁用于临床会诊。

二、检测旨趣领悟伸开剩余87%

试剂盒经受双抗体夹心法进行检测。率先，将抗大鼠血管内皮滋长因子（VEGF）抗体包被在酶标板上，如同搭建了一个 “检测平台”。当加入样品或法度品时，其中的 VEGF 会与包被抗体聚合。接着，加入辣根过氧化物酶记号的抗体，酿成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物。完成响应后，通过洗板操作去除游离因素。随后加入显色底物（TMB），在辣根过氧化物酶的催化下，TMB 呈现蓝色，加入阻隔液后更正为黄色。情绪的浅深与样品中 VEGF 的浓度呈正联系，通过酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），即可缠绵出样品浓度。

三、试剂盒构成一览

试剂盒的各个构成部分协同职责，共同完成检测任务：

微孔酶标板：有 96 孔（12 孔 ×8 条）和 48 孔（12 孔 ×4 条）两种成就，可拆卸，是响应发生的时事。 法度品：6 管 0.3mL，浓度从高到低按序为 320、160、80、40、20、10 pg/mL，是绘图法度弧线的进攻依据。 样本稀释液：96 孔成就为 6mL，48 孔成就为 3mL，用于稀释样本，确保检测的准确性。 检测抗体 - HRP：96 孔成就 10mL，48 孔成就 5mL，厚爱与抗原聚归拢传递信号。 20× 洗涤缓冲液：96 孔成就 25mL，48 孔成就 15mL，使用时需用蒸馏水按 1：20 稀释，用于清洗响应板，去除杂质。 底物 A 和底物 B：96 孔和 48 孔成就分辨为 6mL 和 3mL，在检测历程中施展显色作用。 阻隔液：96 孔和 48 孔成就均为 6mL 和 3mL，用于阻隔响应。需属目，它具有隐微腐蚀性，使用时要幸免构兵衣物或眼、手等皮肤裸露部位。 封板膜：2 张，可剪辑，用于封住响应孔，防患稠浊。 使用诠释书：1 份，详备先容试验法子和属目事项，是试验操作的进攻指南。 自命袋：1 个，用于临时保存未用完的板条。

使用时务必旋紧统统试剂瓶盖，防患挥发和微生物稠浊，试剂本体体积以发货为准，使用时应量取，切勿径直倒出。

四、自备试验器材

进行试验需要准备以下器材：

酶标仪（450nm）：用于精确测量吸光度，为试验提供关节数据。 高精度加样器及枪头：包括 0.5 - 10uL、2 - 20uL、20 - 200uL、200 - 1000uL 等不同规格，确保加样的精确度。 37℃恒温箱：为试验提供稳当的温度环境，保险试验顺利进行。 蒸馏水或去离子水：用于稀释试剂。 五、样品汇集要领

不同类型的样品，汇集要领各有特质：

血清：全血样品室温舍弃 2 小时或 4℃过夜，然后以 2000prm 的转速离心 20 分钟，取上清液即可检测。汇集血液需使用一次性无内毒素试管。 血浆：保举使用 EDTA 钠盐抗凝，样品汇集后 30 分钟内，以 2000prm 的转速离心 15 分钟，取上清液检测。要幸免使用溶血和高血脂的样品。 组织匀浆：用预冷的 PBS (0.01M，pH = 7.4) 冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的 PBS（一般按 1: 9 的分量体积比，可阐明试验需要调治并纪录，保举在 PBS 中加入卵白酶扼制剂）加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。可通过超声落空或反复冻融进一步裂解组织细胞，终末以 5000prm 的转速离心 5 - 10 分钟，取上清液检测。 细胞索要液：贴壁细胞用冷的 PBS 轻轻清洗，然后用胰卵白酶消化，以 2000prm 的转速离心 5 分钟后汇集细胞；悬浮细胞可径直离心汇集。汇集的细胞用冷的 PBS 洗涤 3 次，每 1×10⁶ 个细胞中加入 150 - 200 μLPBS 重悬，反复冻融使细胞落空（若含量很低可减少 PBS 的体积），终末以 2000prm 的转速离心 10 分钟，取上清液检测。 细胞培养上清或其他生物体液：以 2000prm 的转速离心 20 分钟，撤退杂质及细胞碎屑，取上清液检测。 六、样品属目事项 保存与贬责：样品汇集后若在 1 周内检测，可存于 4℃；若不可实时检测，需按一次用量分装，冻存于 - 20℃以下，幸免反复冻融。溶血标本会影响检测遵循，不宜使用。 浓度调治：若样品中检测物浓度高于法度品最高值，需阐明本体情况合适稀释（提倡先作念预试验拉梯度，笃定稀释倍数）。 骚扰因素：使用化学裂解液制备样品可能导致测值偏差，某些重组卵白可能与试剂盒抗体不匹配，无法检测。 七、检测前准备职责 均衡温度：提前 60 分钟从雪柜中取出试剂盒和样本，在室温（25 - 28ºC）下充分均衡，这对试验遵循的准确性至关进攻。每次检测后剩余试剂应实时放回 4℃保存。 配制洗涤液：从雪柜中取出的浓缩洗涤液若有结晶，属闲居景色。室温下轻摇至结晶全齐溶化，将 20ml 浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释成 400ml 职责浓度的洗涤液，未用完的放回 4℃。 八、操作法子 准备板条：缠绵所需预包被板条数，取出舍弃在 96 孔框架内，剩余板条密封放回 4℃。 均衡试剂和样本：将试剂盒和样本在室温（25 - 28ºC）下均衡 60min，确保充分均衡。 缔扞拒应孔：缔造法度品孔、样本孔和空缺孔。 加样：法度品孔各加 50 μL 不同浓度法度品；样本孔加 50 μL 待测样本（可阐明情况稀释）；空缺孔加 50 μL 样本稀释液。 温育响应：各孔加 100 μL 辣根过氧化物酶（HRP）记号的检测抗体，用封板膜封住响应孔，37℃温育 45min。 洗板操作：弃去液体，吸水纸拍干，每孔加 350μL 洗涤液，静置 20s 后甩去，相通 5 次（也可用洗板机）。 加入底物：每孔加底物 A、B 各 50 μL，37℃避光孵育 15min。 阻隔响应与读数：每孔加 50 μL 阻隔液，15min 内在 450nm 波所长测定各孔 OD 值。 九、试验遵循缠绵 复孔贬责：法度品及样本若设复孔，取平均值缠绵。 绘图法度弧线：以法度品浓度为纵坐标，O.D. 值为横坐标，绘出法度弧线（R² 值越趋近于 1 越好）。 缠绵样品浓度：通过样品吸光度值和法度弧线（直线拟合或 4 参数拟合）缠绵样品浓度（可使用职责主谈主员提供的缠绵软件）。若样品稀释，乘以相应稀释倍数得本体浓度。 十、精密度、回收率与线性 精密度：通过对不同浓度样本在板内（1 块板子上检测 20 次）和板间（3 块板子上检测 20 次）的检测，批内和批间变异悉数标明试剂盒精密度讲究。 回收率：往不不异本添加已知浓度 VEGF 作念回收试验，血清、血浆、细胞培养基等样本各有回收率边界和平均回收率。如血清样本回收率边界 82 - 102%，平均回收率 95%；血浆 (EDTA) 样本回收率边界 86 - 106%，平均回收率 98%；细胞培养基样本回收率边界 87 - 107%，平均回收率 100%。 线性：对添加 VEGF 的样本进行不同倍数稀释回收试验，不同稀释倍数下各种本有相应回收率边界和平均回收率。如 1:2 稀释时，血清样本回收率边界 94 - 108%，平均回收率 100%；血浆 (EDTA) 样本回收率边界 88 - 106%，平均回收率 99%；细胞培养基样本回收率边界 89 - 113%，平均回收率 99%。 十一、警告与友情教导

本试剂盒的阻隔液为稀硫酸，具有隐微腐蚀性，使用时需幸免构兵皮肤和衣物。试剂盒使用已毕后，应妥善贬责联系耗材，保护环境。

十二、全面诠释 质地期间风险：受现存要求限制，家具可能存在质地期间风险。 内源性骚扰因素：虽去除部安分源性骚扰因素，但不摈弃仍有影响因素。 试验影响因素：试验遵循受试剂、操作、环境等因素影响，公司对试剂盒厚爱，用户需预留填塞样本。 试剂使用范例：只使用试剂盒内试剂，不混用其他家具，严格按诠释书操作。 储存与操作：幸免试剂强光映照，盖紧瓶盖，防患挥发和稠浊。 闲居景色：刚开启酶联板孔内少量水样物资不影响遵循，使用时再取出酶标板。 遵循相配：操作或仪器参数缔造不妥可能致遵循相配，试验前需仔细阅读诠释书并调治仪器。 遵循重现性：换取东谈主员操作也可能遵循不同，需抑制试验各法子操作。 检测遵循各异：运载、成立等因素可能使检测遵循与出厂数据不一致，不同批次试剂盒也可能有各异。 检测遵循对比：未与其他厂家同类试剂盒对比，可能出现检测遵循不一致情况。 用途截止：试剂盒仅用于科研，用于其他用途公司不承担包袱。

通过以上先容开云体育，但愿科研东谈主员能更好地使用大鼠血管内皮滋长因子（VEGF）ELISA KIT，为科研职责带来更多助力。

发布于：湖北省